Método para la detección y determinación de carga viral del virus del papiloma humano
Esta innovadora invención para la detección y la determinación de la carga viral del virus del papiloma humano comprende un par de cebadores degenerados capaces de amplificar un fragmento del gen L1 de varios genotipos del virus del papiloma humano (VPH) y un método de detección y de cuantificación de la carga viral del VPH en muestras biológicas aisladas.
La infección por virus del papiloma humano (VPH) es una de las causas principales de desarrollo de carcinoma de cuello uterino, además de ser el agente responsable de una de las enfermedades de transmisión sexual más frecuentes en el mundo. Se han descrito más de 120 tipos de VPH.
La presente invención proporciona un par de cebadores degenerados, capaces de amplificar un fragmento del gen L1 de varios genotipos del virus del papiloma humano (VPH), y un método de detección y cuantificación de la carga viral del VPH en muestras biológicas aisladas. Los cebadores degenerados han sido diseñados a partir de la familia de cebadores SPF previamente descritos para detección de VPH y son capaces de amplificar, con eficiencias similares, un fragmento de 22 pares de bases del gen L1 de varios genotipos del virus, lo que permite detectar y cuantificar VPH en las muestras en una sola reacción independientemente de cuál sea el genotipo que las infecta, sin necesidad de realizar un genotipado previo del virus, de emplear sondas y/o cebadores específicos de tipo o de usar conjuntos de cebadores (específicos o degenerados) que permitan amplificar diferentes cepas del virus.
Un interesante aspecto de la invención se refiere a un kit de detección y cuantificación de la carga viral del VPH, que comprende los cebadores de la invención y que también puede comprender cebadores, sondas y todos aquellos reactivos necesarios para llevar a cabo el método de la invención. Además, dicho kit puede incluir el uso de tampones, polimerasas, cofactores para obtener una actividad óptima de éstas, agentes para prevenir la contaminación, etc. así como incluir todos los soportes y recipientes necesarios para su puesta en marcha y optimización.